Моноазид этидия бромид

Описание

Моноазид этидия бромид (EMA) — фотоактивируемый флуоресцентный краситель, интеркалирующий ДНК, применяемый в молекулярной биологии для избирательного мечения генетического материала мёртвых клеток в присутствии живых. В неактивированном состоянии соединение не флуоресцирует и служит фотоаффинной меткой: после проникновения через повреждённую мембрану мёртвой клетки и связывания с ДНК оно под действием видимого света образует устойчивый ковалентный аддукт с нуклеиновой кислотой.

Основные атрибуты

• CAS №: 58880-05-0
• Химическая формула: C21H18N5,Br
• Молекулярный вес: 420,31
• Точная масса: 419,075
• Характеристика PSA: 44,3
• XLogP3: 2,52936

Физико-химические характеристики

• Внешний вид: порошок апельсинового цвета
• Температура плавления: выше 200 °C
• Растворимость: растворим в ДМФА (диметилформамиде)
• Условия хранения: -20 °C

Область применения

EMA используют в методе жизнеспособной ПЦР (viability PCR, v-PCR) для дифференциации живых и мёртвых бактериальных клеток в пробах смешанной микрофлоры — реагент проникает только через нарушенную мембрану погибших клеток, интеркалирует их ДНК и после фотоактивации видимым светом образует ковалентный моноаддукт, блокирующий последующую амплификацию этого фрагмента ДНК в ПЦР. Благодаря этому свойству сигнал ПЦР от мёртвых клеток подавляется, а количественный анализ отражает только жизнеспособную фракцию микроорганизмов. Метод применяется в микробиологии пищевых продуктов, экологическом мониторинге качества воды, диагностике легионеллёза и других задачах, где важно отличить живые патогены от погибших. Также применяется в микроскопии и проточной цитометрии как маркер клеточной гибели.

Ограничения метода

В ряде исследований показано, что EMA способен частично проникать и в неповреждённые мембраны некоторых живых клеток, что может приводить к ложноотрицательным результатам — заниженной оценке числа живых клеток. Для отдельных видов бактерий, включая некоторые стафилококки, метод признан не полностью пригодным для достоверного разграничения живых и мёртвых клеток, поэтому выбор между EMA и родственным реагентом пропидий моноазидом делается индивидуально под конкретный микроорганизм и задачу.

Информация по технике безопасности

• Транспортные коды: NONH для всех видов транспорта
• WGK Германия: 3
• Номер RTECS: SF7941850

Условия хранения и транспортировки

Хранить при температуре -20 °C в защищённой от света таре — фотоактивируемый краситель разлагается или преждевременно активируется при воздействии видимого света, поэтому работу с реагентом ведут при приглушённом освещении или в затемнённых пробирках. Транспортных ограничений по классификации ООН не установлено (NONH для всех видов транспорта). Как интеркалирующий агент, потенциально мутагенный по структурной аналогии с бромидом этидия, требует обращения в перчатках, с исключением прямого контакта с кожей и слизистыми.